鸡内脏研磨怕影响 HI-C 数据？高速冷冻研磨均质仪：全程低温环境 + 高频振动，均质化更彻底

使用高速冷冻研磨均质仪研磨鸡内脏，后续建库做HI-C实验。由于HI-C 实验对样本完整性和染色质构象的要求严苛，尤其是鸡内脏(如肝脏、肾脏)这类富含酶类和结缔组织的样本，全程低温保护与彻底均质化是下游建库成功的关键。我们通过净信高速冷冻研磨仪(JXFSTPRP-192CL)处理鸡肝脏样本，成功解决了 “低温维持难”“组织坚硬磨不碎” 两大痛点，为 HI-C 实验提供了高质量的起始材料。

　　高速冷冻研磨均质仪 JXFSTPRP-192CL

　　实验背景：鸡内脏样本的两大挑战

　　HI-C 实验需要保留染色质的空间构象，任何温度波动或机械损伤都可能导致 DNA 断裂、交联失效，*终影响互作信号的准确性。而鸡肝脏组织存在两个显著难点：

　　低温敏感：样本中含大量内源性核酸酶和蛋白酶，常温下 10 分钟即可引发染色质降解，必须全程维持 - 20℃以下环境;

　　质地坚硬：鸡肝脏虽为软组织，但富含结缔组织和血管，传统研磨易出现 “块状残留”，导致细胞破碎不完全，交联效率差异大。

　　前期两次手工研磨尝试均失败：因液氮挥发后温度回升，样本解冻后染色质降解，建库后测序数据中 “无效互作” 占比超 40%;第二次虽全程补加液氮，但手工研磨不彻底，镜检发现 30% 的组织块未破碎，*终文库复杂度不足，实验被迫中止。

　　解决方案：高速冷冻研磨均质仪的 “低温 + 高频” 协同策略

　　针对鸡内脏样本特性，我们采用净信高速冷冻研磨均质仪，通过以下参数设置实现突破：

　　全程超低温锁鲜，阻断酶活性，高频振动破碎，实现均质化

　　组测试参数提前将样品放入液氮里面冷冻10分钟，再放入2 mL离心管里，放了一颗3mm的珠子，一颗2mm的珠子，后用65HZ,研磨两分钟。没有研磨粉碎，样品太坚硬了。

　　第二组测试参数 用了5ml的研磨管，放了5mm的研磨珠两颗，3mm研磨珠一颗，样品还是从度-80度冰箱拿出后放入液氮里面浸泡10分钟后，调65HZ,研磨一分钟后，出来效果很好，是粉末状。

　　操作总结：第二次的研磨设置达到了研磨要求，当样品粉碎不彻底的情况下，可以更换一下大号珠子重新进行研磨。

　　实验效果：

　　样品研磨前后效果对比图

　　关键操作要点与注意事项

　　1、研磨管对称装载：因仪器高频振动，需在相对位置放置重量一致的平衡管(含等量缓冲液 + 研磨珠)，避免仪器偏移导致的温度波动;

　　2、研磨珠选择：鸡内脏组织建议用 “3mm 钢珠 + 1 颗 5mm 钢珠” 组合，兼顾破碎效率与样本接触面积;

　　3、防污染处理：每批次实验后，研磨仓用 75% 酒精擦拭，研磨管和钢珠经 121℃高压灭菌 30 分钟，避免交叉污染(尤其处理不同鸡个体样本时)。

　　实验结论：高速冷冻研磨均质仪通过 “超低温环境 + 高频振动”的协同作用，完美解决了鸡内脏样本在 HI-C 实验中的两大痛点：既通过全程低温阻断了染色质降解，又通过高效破碎确保了细胞均一性。相比传统方法，该方案使样本处理时间大大缩短，实验成功率从50%提升至 100%，为动物内脏组织的 HI-C、ATAC-seq 等对 “染色质完整性” 敏感的实验提供了可靠的前处理方案。后续尝试处理鸡肾脏、脾脏等样本，均获得类似效果，证明该方法对禽类内脏组织具有普适性。