实验名称：高压均质机处理大肠杆菌

大肠杆菌破壁的方法

①酶解法：酶解法是实验室普遍使用的大肠杆菌破壁的方法，溶菌酶可以直接对大肠杆菌破壁，但酶的使用较为昂贵，增添了成本，同时溶菌酶的存在可能会干扰重组蛋白的功能。

②化学渗透法：化学渗透是指借助跨膜电化学质子梯度来驱动分子逆浓度梯度跨膜的耗能过程，对大肠杆菌的破碎效率很低，进而显著影响蛋白质的提取。

③机械法：机械法是指借助外部剪切力对大肠杆菌实施物理层面的破壁，直接释放胞内蛋白。机械法对设备的要求比较高，合适的剪切力才能既破壁又保证蛋白质的生物活性。

高压均质机有如下优点：

①单支陶瓷柱塞驱动，出料流量可控制。

②变频流量控制系统，按需流量可调。

③数显压力传感系统，可选配实时压力曲线监测系统。

④样品残留量：零残留。

实验案例：

1.准备高压均质机、冷水机、离心机、根据实验量取合适的均质机料杯，以及适量杆菌液体。

2.将2根胶管把冷水机的进出水口与主机的出料冷却器进行连接。

3.将冷水机提前20分钟打开预冷，温度设置2度。

4.待冷水机温度达到实验均质要求后，往料杯倒入大肠杆菌进行均质，循环次数为5次，压力为1000bar。

5.完成均质后，将液体放入离心管中进行离心，根据实验对象进行离心转速设置，完成离心后取出离心管，即可进行后续实验。

6.仪器均质完成后，均质机需加清水进行清洗，清洗完毕后，往料杯口加入75度酒精进行封存，防止细菌滋生，以备下次使用。

实验前

实验后

离心后

注意事项：

1、严禁在无物料的情况下带压空运行。

2、设备运行过程中，进料要求稳定、均一、且不可间断。

3、使用时应尽量避免泵体内吸入空气。

4、使用结束后，往料杯倒入75%酒精进行封存。

TIPS: 高压均质机是一款利用高压泵将物料加压至一定压力后，通过均质阀的狭窄缝隙，使物料在高压下受到剪切、冲击和空穴效应等作用，从而达到均质、乳化和破碎等目的的设备。具有压力高、体积小、操作便捷、处理效率高等特点；应用于制药、生物工程、食品、精细化工等领域。